SimPlate 復合酶底物法的工作原理

復合酶技術培養基，即 SimPlate 法培養基，采用 IDEXX 復合酶技術（MET）檢測水中菌落總數。該試劑含有多種獨特的酶底物。各個底物會與不同的細菌酶結合。大多數常見的水生細菌酶都會被結合。

這些酶底物在代謝過程中全都會發出同一種信號。這便使某一特定的水生細菌能夠代謝一種或多種酶底物，并發出信號。若使用的是SimPlate 復合酶底物法，這個信號是指在 366 nm 紫外光燈下發出的熒光。

在將樣品和培養基加入84孔定量盤后，隨著旋動定量盤，盤上的孔會被自動填滿。無需移液。

待孔都被填滿后，將84孔定量盤傾斜90-120度，使多余的樣品培養基混合液流入吸液海綿墊。SimPlate 上共有 84 個孔。在將多余液體倒出后，利用表面張力，每個孔內都將盛有適量的樣品培養基混合液。

為了避免水蒸氣在皿蓋上凝結形成水珠，應將 SimPlate 定量盤倒置培養。由于每個孔都是相對獨立的，某一孔中細菌產生的熒光不會影響其他孔的反應。

數出有熒光反應的孔數，查MPN表（產品中提供）得出一個最大可能數（MPN）。由于孔數（84）比較多，計數范圍就很大，95% 置信界限也比較精確。使用SimPlate 復合酶底物法，計數范圍能達到 <1 到 738，這個范圍是傳統平皿傾注法的兩倍以上。

第 1 步

混勻盛放樣品的容器，取出1mL水樣。

第 2 步

將1 mL 樣品和9mL 無菌水加入 SimPlate 培養基管中。

第 3 步

蓋上管蓋搖勻后，全部液體倒入 SimPlate 84孔定量盤中。

第 4 步

水平旋動 84孔定量盤，每個孔中都充滿液體。

第 5 步

將84孔定量盤傾斜90-120°，多余液體被盤內海綿條吸附，倒置培養 48 小時。

第 6 步

在 366nm 紫外燈及燈箱內讀取顯熒光結果。